不同溶剂竹叶提取物的抗氧化活性研究.doc

1、不同溶剂竹叶提取物的抗氧化活性研究摘要：依次采用石油醚、氯仿、乙醇和水作为提取溶剂，竹叶提取物分别从对OH和O2-的清除率和还原力比较研究其抗氧化活性。结果表明:不同溶剂竹叶提取物对OH和O2-具有一定的清除能力, 且随浓度的增大而抗氧化性增强；随着不同溶剂竹叶提取物浓度的增大，其还原力显著增强。该研究为竹叶提取物在食品和医药行业的应用提供了科学依据。关键词：竹叶 提取物 抗氧化活性 Study on the Antioxidant Activity of Different Solvent Extracts of Bamboo LeavesAbstract: Bamboo leaves we

2、re sequentially extracted with petroleum, chloroform, methanol and water, and the antioxidant abilities of the extracts of different solvent from bamboo leaves finally the scavenging effect on superoxide anion and hydroxyl radical and reducing power were determined. Result showed that the scavenging

3、 rate of bamboo leaves extracts to superoxide anion radical and hydroxyl radical assumed rise trend with the increase of extracts concentration. This study provided scientific basis for the application of cassia seed extracts in the line of food and medicineKey Words: Bamboo Leaves Extract Antioxida

4、nt activity 【引言】目前，抗氧化剂已广泛应用于食品工业、医药行业、和化妆品行业。许多现代文明病与人体缺乏抗氧化营养物质有关，而补充抗氧化营养物质则有助于对这些疾病的预防治疗，因此寻找天然、安全、有效的抗氧化剂资源就显得尤为重要。自由基是一类外层轨道上具有不配对价电子的原子、原子团或分子。自由基在体内积聚会引起生物大分子如脂质、蛋白和核酸的氧化损伤，导致多种疾病的发生。由于化学合成的抗氧化剂如BHA、BHT和PG等由于安全性原因, 应用范围受到限制，因此从自然界中寻找天然的抗氧化物质非常重要。中国素有“竹子王国”之称，种类，面积和竹材产量均占世界的三分之一左右，但相对于竹木和竹笋的利

5、用来说，竹叶作为剩余产物往往被抛弃造成了极大的资源浪费，大量研究表明竹叶中含有黄酮类 1，酚酸类，蒽醌类化合物，具有显著的抗自由基、抗氧化、抗菌、抗病毒等生理活性2-5 ，最早由李慧珍等发现竹叶具有优良的防腐性能，能加入食品作为天然的保鲜剂、防腐剂，稳定性好，毒性小。杨英、杨卫东和倪向梅研究了竹叶黄酮提取物的抑菌活性，发现竹叶黄酮提取物水解产物的抑菌和杀菌效果较好6-8。倪向梅、曹光群等人研究竹叶提取物的抗氧化性活性，发现三氯甲烷和乙酸乙酯部分萃取物的抗氧化性明显优于水提物8。罗宇倩等发现竹叶黄酮清除超氧负离子自由基和DPPH自由基的能力比茶多酚强；竹叶黄酮在清除羟自由基效果与茶多酚相当，比V

6、c效果好。竹叶黄酮对DPPH自由基、超氧负离子自由基和对羟自由基的有效清除作用表明其具有较好的抗氧化功能，可作为一种新的食品天然抗氧化剂9。袁珂, 薛月芹等采用回流提取、超声波提取、渗漉提取、冷浸提取、微波提取和索氏提取6种不同的方法进行提取,并对提取物的收率进行比较，结果表明,不同提取方法所得的提取物中总黄酮的收率大小次序为:超声波法微波法回流法渗漉法索氏法冷浸法10。对于竹叶提取物抗氧化的研究较多，但对不同溶剂竹叶抗氧化性的比较研究却鲜有报道。本试验通过竹叶不同溶剂提取物对OH和O2-的清除作用以及还原能力的比较, 研究提取物的抗氧化活性。该研究为竹叶进一步应用开发和天然抗氧化物质的利用提

7、供依据。1 实验 1.1 仪器与材料1.1.1 仪器721分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；FA2004N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；RE5299旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；DHG-9076A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；KQ500DE超声清洗器（江苏省昆山市淀山湖镇）；SHB-IV双循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）1.1.2 材料水杨酸（天津试剂六厂）；30%过氧化氢（洛阳昊华化学试剂有限公司）；三氯乙酸（天津市凯通化学试剂有限公司）；铁氰化钾（天津市凯通化学试剂有限公司）；邻苯三酚（天津市凯通化学试剂有限公司）；浓盐酸（西安三浦精细化工

8、厂）；无水乙醇（天津市河东区红岩试剂厂）；七水合硫酸亚铁；竹叶（采于天水师范学院校园内干燥后备用）；石油醚(西安三浦精细化工厂)； 三羟甲基氨基甲烷(Tris，上海化学试剂采购供应站)；其余试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。1.2抗氧化实验1.2.1 不同溶剂竹叶提取物的提取称取四份5g（干基）竹叶粉，分别加入100mL的石油醚，氯仿、乙醇和蒸馏水，在30超声强度90%下超声萃取30min后，过滤，旋转蒸发浓缩至浸膏状，用无水乙醇定容止10mL, 4下保存待用。1.2.2 总黄酮含量的测定分别取四种提取物样品溶液各0.02mL，各加入5%的亚硝酸钠溶液0.15mL，摇匀，放置6min后再加入1

9、0%的硝酸铝溶液各0.15mL，摇匀，放置6min，再加入1mol/L的氢氧化钠溶液2mL，用95%乙醇稀释至刻度5mL, 摇匀，放置15min，在510nm处测定吸光度11。1.2.3 对羟基自由基的清除清除羟基自由基的能力是体外常用的评估抗氧化方法之一。本实验采用了水杨酸捕获法，利用Fenton体系产生羟自由基，加入水杨酸来捕获，能在510nm产生强吸收的有色物质，通过测定其吸光度来判定。取2mmol/L的硫酸亚铁溶液1mL，6mmol/L过氧化氢1mL，水杨酸1mL，加入样品1mL，静置30min，以蒸馏水为参比，在510nm处测定吸光度，计算羟自由基的清除率E。E(%)=(A0-AX+

10、Ay)/A0100%式中：A0为以溶剂代替药液的试剂空白管的吸光度；AX为加了药液的吸光度；Ay为不加显色剂药液本底光密度，是为了减去药液本身颜色对于实验的影响。1.2.4对超氧自由基的清除取0.05mol/L pH= 8.2 的Tris-HCl缓冲液4.6mL置于试管中，于25水浴加热20min加不同浓度供样品试液1.0mL，10mmol/L邻苯三酚0.4mL，混匀，于25水浴4min，加8mmol/L HCl 0.1mL终止反应，以pH=8.2的Tris-HCl缓冲液调零，在325nm处测定吸光度AX，模型对照组(A0)用溶剂代替供试液。考虑试液本身的吸光度值，用溶剂代替邻苯三酚溶液作为样

11、品对照组(AX0)。每个浓度组平行测定3次，求其平均值。测定结果以清除率(E)表示，计算公式如下：E(%)=A0-(AX- AX0)/ A0100%1.2.5还原能力的测定 还原能力的强弱，可以反映试液的潜在抗氧化性能，是抗氧化的一个重要指标。本实验用的是铁氰化钾法，取2mL的样品，加入2mL的磷酸缓冲液（pH为6.6）和1%的铁氰化钾溶液2ml, 振荡混合后取的混合液, 加入去离子水和0.1%的三氯化铁溶液, 静置10min, 用去离子水为空白, 在700nm下进行比色, 吸光度的值越大, 说明还原能力强。2 结果与讨论2.1不同溶剂提取所得提取物量及提取率的比较不同溶剂提取所得提取物量及提

12、取率的比较如图1所示，石油醚，氯仿，乙醇和水提取物量有所不同，其中氯仿水乙醇石油醚。图1不同溶剂提取所得提取物量及提取率的比较Table 1 Comparison of mass and yields of extracts obtainedwith different solvents提取溶剂提取物质量/g提取率/%石油醚0.075680.01512氯仿0.74240.1485乙醇0.3080.06157水0.68290.13652.2不同溶剂提取物中总黄酮提取率的比较根据参考文献11, 吸光度和黄酮含量关系满足：Y=3.9768X-0.0003 (Y为吸光度，X为黄酮含量), 由实验测得不

13、同溶剂竹叶提取物的总黄酮含量如表2可知，不同溶剂提取物中总黄酮的总含量不同，在浓度一定时，其中提取量水石油醚乙醇氯仿。黄酮的提取量与其在510nm处的吸光度有关，吸光度越大，总黄酮含量越大。不同溶剂提取物的紫外吸收光谱如图1所示。表2不同溶剂提取物中总黄酮提取率的比较Table 2 Comparison of flavonoids yields obtained with different solvents提取溶剂总黄酮含量/g总黄酮提取率/%石油醚0.0740.01479氯仿0.0022190.0004439乙醇0.002710.0005417水0.4900.09796 图1 不同溶剂竹叶

14、提取物的紫外光谱(1)乙醇 (2)水 (3)氯仿 (4)石油醚Fig.1 UV spectrum of extracts of bamboo leaves obtained with different solvents 2.3不同溶剂竹叶提取物对羟基自由基的清除从图2可以看出竹叶提取物对OH具有一定的清除能力，不同浓度使其吸光度不同，且随着竹叶提取物浓度的依次增大，其对OH的清除能力依次增强。当浓度相同时清除能力氯仿乙醇石油醚水。氯仿的清除能力最强，当氯仿的浓度达到37mg/ml时对OH的清除率达到30%。且随着浓度的变化，其清除能力的变化也明显，水的清除能力受浓度的影响较小，石油醚受浓度的

15、影响最大。图2 不同溶剂竹叶提取物对羟基自由基的清除Fig.2 The scavenging effect of OH of different solvents extracts of bamboo leaves 2.4不同溶剂竹叶提取物对超氧负自由基的清除从图3可以看出竹叶提取物对O2-具有一定的清除能力，随着竹叶提取物浓度的依次增大，其对O2-的清除能力呈增大的趋势。当浓度相等时，清除能力氯仿乙醇石油醚水。当竹叶提取物浓度增大到37mg/mL时，对O2-的清除率为92.9%。四种提取物都受浓度的影响较小，浓度增大时，其吸光度几乎呈平稳状态。图3不同溶剂提取物对超氧负自由基的清除Fig.3

16、 The scavenging effect of O2- of extracts obtained with different solvents2.5不同溶剂提取物的还原能力还原能力的强弱，可以反映药物潜在的抗氧化性能，吸光度是重要指标，在此方法中吸光度的值越大，则其还原能力越强，由图4可知，随着竹叶提取物浓度的增大，其还原力显著增强。当浓度相同时，其还原能力为氯仿乙醇石油醚水，其中石油醚的吸光度受浓度的影响最大，其次为氯仿，乙醇和水。图4不同溶剂提取物的还原能力Fig.4 The effective reducing power of extracts obtained with dif

17、ferent solvents3 结论3.1 竹叶提取物当中含有一定量的黄酮，其中蒸馏水对黄酮的提取率最高；3.2 不同溶剂竹叶提取物能够有效清除OH和O2-, 并具有一定的还原能力，表明竹叶提取物具有一定的抗氧化和清除自由基的功能；【参考文献】1 周建新.植物源天然食品防腐剂的研究现状、存在问题及前景J.食品科学,2006,27(1):263-2642 Bahorun T, Luximon-Ramma A, Crozier A, et al. Total phenol, flavonoid, proanthocyanidin and vitamin Clevels and antioxida

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