柑橘黄龙病研究与展望.ppt

1、柑橘黄龙病柑橘黄龙病研究与展望研究与展望5.防治方法简介防治方法简介1.柑橘黄龙病的简介柑橘黄龙病的简介2.柑橘黄龙病病原菌柑橘黄龙病病原菌3.病害流行条件病害流行条件4.检测技术简介检测技术简介目录：目录：目录：目录：6.存在问题及展望存在问题及展望1.1.柑橘黄龙病的简介柑橘黄龙病的简介柑橘黄龙病的简介柑橘黄龙病的简介柑柑橘橘黄黄龙病病又又称称黄黄梢梢病病、黄黄枯枯病病、青青果果病病。已已成成为制制约柑橘柑橘产业健康健康发展的关展的关键因素之一因素之一。柑柑橘橘黄黄龙病病是是一一种种系系统性性病病害害，染染病病后后没没有有办法法根治，只有根治，只有全株全株挖除挖除，因此俗称柑橘上的因此俗称

2、柑橘上的癌症癌症。柑柑橘橘黄黄龙病病是是一一种种世世界界性性的的柑柑橘橘病病害害。目目前前，在在印印度度、亚洲洲、东南南亚、阿阿拉拉伯伯半半岛和和非非洲洲等等地地方方都都有有发生生。2004年年，巴巴西西和和美美国国的的佛佛罗里里达达州州也也发生了黄生了黄龙病。病。柑橘黄龙病在我国的分布图柑橘黄龙病在我国的分布图 柑柑橘橘黄黄龙龙病病在在我我国国最最早早于于1919年年在在广广东东省省潮潮汕汕地地区区发发现现，以以后后在在福福建建、广广西西、海海南南、江江西西、浙浙江江、四四川川、云云南南、贵贵州州、湖湖南南和和台台湾等地相继发现。湾等地相继发现。柑橘黄龙病发病症状柑橘黄龙病发病症状柑橘黄龙病

3、发病症状柑橘黄龙病发病症状1.枝梢症状枝梢症状个别枝梢先发病，出现个别枝梢先发病，出现黄梢黄梢；很少表现为一；很少表现为一开始就呈现全株性症状的。开始就呈现全株性症状的。进行田间鉴定时进行田间鉴定时,根据叶片的黄化类型即可作根据叶片的黄化类型即可作出比较准确的诊断。出比较准确的诊断。黄龙病树上叶片的黄化有三种类型黄龙病树上叶片的黄化有三种类型,即即斑驳型斑驳型黄化、均匀黄化和缺素状黄化黄化、均匀黄化和缺素状黄化。2.果实症状果实症状翌年春季提前开花，花小畸形，结果少，果实翌年春季提前开花，花小畸形，结果少，果实畸形，果小似乒乓球，着色不均，果蒂附近着色，畸形，果小似乒乓球，着色不均，果蒂附近着

4、色，俗称俗称“红鼻子果红鼻子果”，果实味酸、品质极差，是识别，果实味酸、品质极差，是识别黄龙病的最主要典型症状。黄龙病的最主要典型症状。3.根部症状根部症状根部症状主要表现为根的根部症状主要表现为根的腐烂腐烂，其严重程度与地，其严重程度与地上枝梢相对称。枝叶发病初期，根多不腐烂，叶片黄上枝梢相对称。枝叶发病初期，根多不腐烂，叶片黄化脱落时，须根及支根开始腐烂，后期蔓延到侧根和化脱落时，须根及支根开始腐烂，后期蔓延到侧根和主根，皮层破碎，与木质部分离。主根，皮层破碎，与木质部分离。斑驳型黄化斑驳型黄化均匀型黄化均匀型黄化缺素状黄化缺素状黄化2.2.柑橘黄龙病的病原菌柑橘黄龙病的病原菌柑橘黄龙病的

5、病原菌柑橘黄龙病的病原菌1979年，柯年，柯冲等人在电镜下首冲等人在电镜下首次观察到了黄龙病次观察到了黄龙病病原，菌体多数呈病原，菌体多数呈圆形、椭圆形，少圆形、椭圆形，少数呈长椭圆形。数呈长椭圆形。但但是是，由由于于黄黄龙龙病病病病原原是是专专性性寄寄生生菌菌，无无法法通通过过人人工工培培养养，有有报报道道曾曾经经称称它它为为类类菌菌原原体体、类类立立克克次次体体、后后来来又又将将其其归归于于类类细细菌菌。20世世纪纪90年年代代，Jagoueix等等利利用用免免疫疫捕捕获获PCR方方法法，用用16SrDNA的的通通用用引引物物对对长长春春花花和和柑柑桔桔病病株株进进行行扩扩增增，获获得得了

6、了黄黄龙龙病病病病原原的的16SrDNA基基因因，才将其命名为才将其命名为Liberibacter，中文名字翻译为，中文名字翻译为韧皮部杆菌韧皮部杆菌。根根据据病病原原对对热热的的反反应应、流流行行区区域域、虫虫媒媒种种类类等等，以以及及单单克克隆隆抗抗血血清清反反应应、克克隆隆的的DNA片片段段的的序序列列分分析析和和DNADNA杂杂交交反反应应等等特特征征，将将黄黄龙龙病病病病原原分分为为亚亚洲洲种种、非非洲洲种种和和美美洲洲种种三三个个种种。我我国国的的柑柑橘橘黄黄龙龙病病菌菌属属于于亚亚洲洲韧皮部杆菌属细菌。韧皮部杆菌属细菌。3.3.病害流行条件病害流行条件病害流行条件病害流行条件苗木

7、带病率、田间病株率及苗木带病率、田间病株率及介体木虱的种群数量介体木虱的种群数量是黄龙是黄龙病发生流行的主要因素。病发生流行的主要因素。黄龙病的发生流行与黄龙病的发生流行与气象条件气象条件有重要关系。有重要关系。栽培管理和植物保护措施栽培管理和植物保护措施是影响黄龙病发生的重要因素。是影响黄龙病发生的重要因素。良好的良好的生态条件生态条件有利阻止病害蔓延。有利阻止病害蔓延。纬度与海拔纬度与海拔:高纬度和高海拔地区发生很少即使发病后高纬度和高海拔地区发生很少即使发病后损失也较小，蔓延慢。损失也较小，蔓延慢。不同不同种类和品种种类和品种的柑橘树抗病或耐病性有差异。的柑橘树抗病或耐病性有差异。4.4

8、.检测技术简介检测技术简介检测技术简介检测技术简介4症状鉴别症状鉴别1235显微镜观测显微镜观测血清学检验血清学检验PCR鉴定鉴定DNA杂交杂交1.症状鉴别症状鉴别 症状鉴别是最简便,也是最为直接的一种诊断方法。可通过黄龙病发病症状观察进行初步诊断。2.显微镜观测显微镜观测 显微镜观测法指的是直接在显微镜下对黄龙病菌的形态、大小进行观测。显微镜观察大多应用电子显微镜观察,由于电镜本身检测技术上的缺点和黄龙病菌在植物体内的菌量低、分布不均等原因,电镜检测技术检测效率只有60%70%,容易造成漏检。所以电子显微镜检测技术多是用来观测病原体的结构等,很少直接用来作病害检测。3.血清学检测血清学检测

9、血清学检验是最为常见的一种病毒检测的方法,原理是抗原和抗体的体外结合,产生特异性沉淀对病毒进行检测的一种技术。虽然血清学检测已在其它病害的检测上获得了巨大的成功,但对黄龙病病原来讲,至今仍没有得到较好的抗体,而且在检测的时候容易造成漏检或假阴性。所以利用血清学进行黄龙病检测还有待进一步的发展,特别是针对解决现在黄龙病抗体制备复杂、检测范围窄等问题。4.PCR鉴定鉴定自V illechanoux 等发表了柑橘黄龙病病原的部分DNA 序列以来,PCR 检测黄龙病的技术得到了巨大发展。常用的PCR 检测技术有常规PCR、定量PCR 和巢式PCR(Nested-PCR)三种。常规PCR 技术 Jago

10、ueix、Hocquellet等采用常规PCR 技术分别对黄龙病亚洲种和非洲种进行了检测,发现常规PCR 技术可以较好的区分两种病原。丁芳等(2004)利用常规PCR 技术检测了田间和广东省农业科学院果树研究所几个感黄龙病品种,发现其可以检测出未显症状的黄龙病材料。定量PCR 技术 定量PCR 是指在PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR 进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。定量PCR 技术不仅可以检测到黄龙病病原,同时可以检测出病原含量多少。田亚南等(1996)报道,运用定量PCR 检测技术,在木虱体内病原含量最多,其次为长春花,而柑橘中病原体相对

11、较少。Nested-PCR 技术 普通PCR 基础上衍生出的巢式PCR技术能有效提高PCR 的特异性和灵敏度,其原理是针对目的基因区域设计两对引物,即一对外侧引物和一对内侧引物,内侧引物扩增片段比外侧的稍短并完全位于外侧引物扩增区域内,这样通过先外侧后内侧二次PCR 反应对特定DNA 片段进行特异性扩增。自Harakava 等首次运用N ested-PCR 技术对柑橘黄龙病进行检测后,其以高的灵敏度得到广泛的推广。5.DNA杂交杂交 DNA 杂交技术是根据两条互补的核苷酸单链可以杂交结合成双链的原理所建立,用一段已知序列的放射性或非放射性标记的核苷酸单链做探针,与待检标本中的DNA 杂交来探查

12、待检标本中有无与之相互补的核酸。Garnier 等首先利用斑点杂交技术成功检测了印度等地的亚洲黄龙病,但是不能很好的检测非洲黄龙病病株。小结：小结：综上所述,显微镜检查对柑橘黄龙病容易造成漏检与假阴性,血清学检测的方法上存在检测范围窄的问题,这两种方法都不适合柑橘黄龙病的检测,DNA杂交技术虽然在灵敏度上有一定的优势,但费用相对较高,且利用同位素过程中存在一定的危险性。所以在生产上一般以症状鉴别为主要手段,进行植物检疫的快速鉴定PCR 技术是最好的措施。5.5.防治方法简介防治方法简介防治方法简介防治方法简介柑柑橘橘黄黄龙龙病病是是世世界界柑柑橘橘生生产产上上最最具具毁毁灭灭性性的的病病害害。

13、至至今今尚尚没没有有特特别别有有效效的的药药物物能能彻彻底底治治愈愈。对对其其防防治治，只只能能以以预预防防为为主主、治治理理为为辅辅。主主要要依依据据“隔隔离离、消消毒毒、防防疫疫”的的观观点点进进行行综综合合防防治治。做做到到园园地地选选择择注注重重“隔隔离离”原原则则,果果苗苗选选择择注注重重“无无病病”原原则则,果果园园健健康康情情况况定定期期检检查查,果果园园管管理理措措施施严格执行。严格执行。主主要要防防治治措措施施有有：强强化化检检疫疫、培培育育和和推推广广使使用用无病苗木、挖除病株、防治柑橘木虱、加强管理。无病苗木、挖除病株、防治柑橘木虱、加强管理。6.6.展望展望展望展望由由

14、于于柑柑橘橘黄黄龙龙病病的的病病原原细细菌菌至至今今仍仍未未培培养养成成功功，所所以以对对该该病病原原的的培培养养性性状状、生生态态特特性性以以及及生生理理生生化化性性状状等等细细菌菌传传统统分分类类学学方方面面的的特特性性仍仍然然知知之之甚甚少少。解解决决病病原原人人工工培培养养的的难难题题意意义义重重大大，不不但但有有助助于于对对病病原原特特性性的的深深入入认认识识和和了了解解，也也有有助助于于病病原原基基因因组组学学的的研研究究，还还可可以以通通过过病病原原的的人人工工培养筛选和获得防治的特效药物。培养筛选和获得防治的特效药物。木木虱虱是是目目前前已已知知的的柑柑桔桔黄黄龙龙病病的的唯唯

15、一一传传播播介介体体，研研究究木木虱虱以以及及其其与与病病原原的的关关系系，对对病病害害的的防防治治无无疑疑具具有有重重要要意意义义。有有试试验验表表明明，在在温温室室或或网网室室中中带带毒毒木木虱虱的的传传病病率率不不高高，是是什什么么因因素素影影响响木木虱虱的的传传病病呢呢？木木虱虱在在传传播播病病原原到到寄寄主主是是否否需需要要某某些些因因素素，这这是是一一个个值值得得探探讨讨的的问问题题，也也许许能能够够为为黄龙病防治提供新的思路和方法。黄龙病防治提供新的思路和方法。在在冬冬季季，柑柑橘橘木木虱虱都都喜喜欢欢飞飞到到果果园园附附近近的的九九里里香香上上越越冬冬。九九里里香香是是芸芸香香

16、科科柑柑桔桔亚亚科科黄黄皮皮属属植植物物，广广泛泛分分布布于于我我国国南南方方及及东东南南亚亚等等热热带带亚亚热热带带地地区区。但但是是，世世界界范范围围内内九九里里香香不不发发病病的的事事实实使使人人们们对对九九里里香香产产生生了了浓浓厚厚兴兴趣趣，希希望望将将九九里里香香的的抗抗黄黄龙龙病病性性状状转转移移到到柑柑桔桔栽栽培培品品种种中中，以以培培育育抗抗黄龙病的柑桔品种。黄龙病的柑桔品种。柑柑桔桔黄黄龙龙病病的的研研究究正正处处于于关关键键时时期期，相相信信随随着着技技术术的的进进步步和和研研究究的的深深入入，柑柑桔桔黄黄龙龙病的研究与根治必将迎来新的曙光。病的研究与根治必将迎来新的曙光。